文章首次發(fā)表于
《中國(guó)醫(yī)學(xué)裝備》雜志
文中實(shí)驗(yàn)所用內(nèi)毒素檢測(cè)試劑盒、鱟試驗(yàn)微生物快速檢測(cè)系統(tǒng)(ELx808IULAXH)及無(wú)熱原耗材均為（廈門鱟試劑生物科技股份有限公司）產(chǎn)品
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王蘇湘 滕朝宇 吳瑕 王宇 (排名不分先后)
[文章編號(hào)]1672-8270（2019）07-0059-06[中圖分類號(hào)]R197.39[文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼]A
關(guān)鍵詞：
血液透析；內(nèi)毒素檢測(cè)試劑盒；廈門鱟試劑；廈門鱟試劑凝膠法鱟試劑；廈門鱟試劑動(dòng)態(tài)濁度法鱟試劑盒；廈門鱟試劑鱟試驗(yàn)微生物快速檢測(cè)系統(tǒng)ELx808IULALXH；標(biāo)準(zhǔn)要求；內(nèi)毒素控制
摘要
目的：依據(jù)血液透析治療對(duì)內(nèi)毒素的相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)要求，采用鱟試劑法對(duì)透析液的內(nèi)毒素含量進(jìn)行檢測(cè)，基于戴明循環(huán)（PDCA）管理模式加強(qiáng)對(duì)透析治療過(guò)程管控，以提高透析治療的醫(yī)療質(zhì)量。
方法：使用透析專用鱟試劑（凝膠法）對(duì)內(nèi)毒素進(jìn)行定性及半定量檢測(cè)，動(dòng)態(tài)濁度法鱟試劑檢測(cè)內(nèi)毒素濃度，根據(jù)國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)及行內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)，判斷所測(cè)的透析液是否合格。
內(nèi)毒素與血液凈化
1.1內(nèi)毒素與鱟試劑法
鱟試劑法是目前測(cè)定內(nèi)毒素的主要方法，該方法檢測(cè)內(nèi)毒素特異性強(qiáng)、靈敏度高且操作方法簡(jiǎn)便，美國(guó)藥典（USP）和中國(guó)藥典（CP）均已收載。檢測(cè)方法有凝膠法和光度測(cè)定法，光度測(cè)定法又包括濁度法和顯色基質(zhì)法。鱟試劑中的C因子能夠與內(nèi)毒素反應(yīng)，激活B因子，活化后的B因子使凝固酶原變成凝固酶，凝固蛋白原在凝固酶的作用下形成凝固蛋白，最終形成凝膠。
1.2內(nèi)毒素污染來(lái)源
與透析有關(guān)的內(nèi)毒素污染來(lái)源主要包括以下4個(gè)方面。
（1）水前處理系統(tǒng)。透析用水的處理系統(tǒng)包括沉淀過(guò)濾器、軟水器、活性碳過(guò)濾器等水質(zhì)前處理系統(tǒng)，以及逆滲透膜系統(tǒng)或去離子器和超過(guò)濾器等。
（2）反滲水輸送管道。管徑大小、材質(zhì)和結(jié)構(gòu)的不同會(huì)造成細(xì)菌滋生，甚至?xí)纬缮锬じ街诠苈返谋砻娑欣?xì)菌的滋生，污染復(fù)用用水。
（3）透析濃縮液配制的過(guò)程環(huán)節(jié)，透析濃縮液的污染，重碳酸鹽透析液非常容易滋長(zhǎng)細(xì)菌。
（4）透析機(jī)的污染，上下機(jī)及兩班連臺(tái)之間的消毒控制。
1.3內(nèi)毒素超標(biāo)的臨床表現(xiàn)
血液透析設(shè)備系統(tǒng)消毒過(guò)程中透析用水、透析濃縮液及透析液內(nèi)毒素超標(biāo)會(huì)將內(nèi)毒素帶入尿毒癥患者血液，導(dǎo)致尿毒癥患者產(chǎn)生內(nèi)毒素血癥。內(nèi)毒素作用于吞噬細(xì)胞、中性粒細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、血小板、補(bǔ)體系統(tǒng)以及凝血系統(tǒng)，并誘生腫瘤壞死因子a（tumor necrosis factor-x，TNF-a）、白細(xì)胞介素-1（interleukin，IL-1）、IL-6和IL-8、組胺以及激肽等生物活性物質(zhì)，使組織器官毛細(xì)血管灌注不足，出現(xiàn)缺氧及酸中毒等。
高濃度的內(nèi)毒素也可激活補(bǔ)體替代途徑，引發(fā)高熱、低血壓以及活化凝血系統(tǒng)，最后導(dǎo)致彌散性血管內(nèi)凝血。嚴(yán)重時(shí)可導(dǎo)致微循環(huán)衰竭和低血壓為特征的內(nèi)毒素休克甚至死亡。發(fā)現(xiàn)后要檢查原因，感染者應(yīng)給予抗感染治療。
2.1 檢測(cè)樣本及樣品收集
（此處省略部分內(nèi)容，如有興趣了解，可聯(lián)系我司獲取此部分內(nèi)容。）
聯(lián)系方式：
廈門鱟試劑銷售熱線：0592-2085561
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2.2 儀器與試劑
采用ELx808IULALXH型鱟試驗(yàn)微生物快速檢測(cè)儀（美國(guó)Bio-Tek公司授權(quán)廈門鱟試劑生物科技有限公司代理出售）；渦旋振蕩儀；恒溫水浴鍋。透析專用鱟試劑檢測(cè)試劑盒（0.25EU/ml，Lot No 130725，Lot No 140825）、透析專用鱟試劑檢測(cè)試劑盒（0.5EU/ml，Lot No 120916，Lot No140705）、透析專用鱟試劑檢測(cè)試劑盒（2EU/ml，Lot No130620，Lot No 140825，Lot No 151201）和動(dòng)態(tài)濁度法鱟試劑盒（Lot No180627B）均來(lái)源于廈門鱟試劑生物科技股份有限公司。細(xì)菌內(nèi)毒素工作標(biāo)準(zhǔn)品，無(wú)熱原吸頭，細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水，無(wú)熱原板條，無(wú)熱原接收管。
2.3 透析相關(guān)細(xì)菌內(nèi)毒素限值
（此處省略部分內(nèi)容，如有興趣了解，可聯(lián)系我司獲取此部分內(nèi)容）
2.4 凝膠法檢測(cè)內(nèi)毒素（透析專用鱟試劑）
（1）陰性對(duì)照溶液的制備。
（2）陽(yáng)性對(duì)照溶液的制備。
（3）樣本溶液的制備。用無(wú)熱原采樣瓶收集適量的透析用水或透析液。按鱟試劑的靈敏度（入）及樣本的內(nèi)毒素限值（L）計(jì)算樣品的最大有效稀釋倍數(shù)（maximum allowable dilution，MVD），其計(jì)算為公式1：MVD=L/入
（4）樣本陽(yáng)性對(duì)照溶液的制備。
（5）實(shí)驗(yàn)操作。從試劑盒內(nèi)取出8支鱟試劑，開啟，設(shè)置檢查項(xiàng)目及加樣見表1。
（6）結(jié)果判斷。將安瓿從恒溫水浴鍋中輕輕取出，緩慢倒轉(zhuǎn)180°。若安瓿內(nèi)的內(nèi)容物呈堅(jiān)實(shí)凝膠，不變形，不從管壁滑脫者為陽(yáng)性，記錄為（+）；不呈凝膠或雖生成凝膠但不能保持完整并從管壁滑脫者為陰性，記錄為（一）。
（7）當(dāng)陰性對(duì)照管結(jié)果均為陰性，陽(yáng)性對(duì)照管和樣品陽(yáng)性對(duì)照管為陽(yáng)性，實(shí)驗(yàn)有效，否則無(wú)效，應(yīng)重復(fù)實(shí)驗(yàn)。
2.5動(dòng)態(tài)濁度法檢測(cè)內(nèi)毒素
（1）程序設(shè)置。
（2）標(biāo)準(zhǔn)曲線制備。
（3）標(biāo)準(zhǔn)曲線及樣品檢測(cè)。
（4）數(shù)據(jù)處理。
設(shè)定啟動(dòng)OD（一般設(shè)定為0.02），軟件自動(dòng)給出啟動(dòng)時(shí)間。建立標(biāo)準(zhǔn)曲線為公式2：
y=-ax+b（2）
式中y為啟動(dòng)時(shí)間的對(duì)數(shù)值，x為內(nèi)毒素濃度的對(duì)數(shù)值，a為直線斜率，b為y軸截距。
當(dāng)陰性對(duì)照的反應(yīng)時(shí)間大于標(biāo)準(zhǔn)曲線最低濃度的反應(yīng)時(shí)間，標(biāo)準(zhǔn)曲線的相關(guān)系數(shù)|r|≥0.980，標(biāo)準(zhǔn)曲線成立。
3結(jié)果
3.1透析專用鱟試劑（凝膠法）
檢測(cè)2014-2017年采用3種規(guī)格透析專用內(nèi)毒素凝膠法檢測(cè)試劑盒檢測(cè)結(jié)果見表2。（數(shù)據(jù)有刪減）
檢測(cè)數(shù)據(jù)表明，嚴(yán)格執(zhí)行相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)及操作規(guī)程后，
2014-2017年透析用水及透析液檢測(cè)結(jié)果均為陰性合格。
3.2動(dòng)態(tài)濁度法檢測(cè)
內(nèi)毒素濃度標(biāo)準(zhǔn)曲線中Y=-0.2593X+2.938